흰점박이꽃무지 추출물(PBE)의 항비만 효능 검정 > 건강이야기

3T3-L1 지방전구세포(한국세포주은행)을 이용하여 PBE의 세포독성 측정을 위해 

1×106 cells/well로 분주된 지방전구세포에 PBE를 농도별(100, 500, 1000, 3000, 5000 ㎍/ml)로 처리 하고 

24, 48, 72시간 동안 배양 후 MTS assay 수행 결과, 5000 ㎍/ml의 고농도에서 72시간 동안 처리시에도 세포독성 없음을 확인하였음

3T3-L1 지방 전구세포를 지방세포로 분화시키는 동시에 PB 처리 후 분화율 확인 

본 실험의 경우 2013년도 보고서에 지방세포 분화 유도 시 PB 동시처리한 후 8일째 

oil-red O staining에 의해 지방세포 분화억제 효능을 확인한 결과, 

PB 2000 ㎍/ml 농도의 처리군에 서 약 23% 분화가 억제됨을 확인할 수 있었다고 보고한 바 있으나, 

지속적인 검증을 한 후 평균적으로 보았을 때 분화억제가 관찰되지 않는 바

 PB에 의한 세포수준에서의 지방세포 분 화 억제율은 관찰되지 않는 것으로 정정 보고함

지방세포 분화 유도시 PBE 동시처리한 후 8일째 중성지방(triglyceride) 측정에 의해 

지방세포 분화억제 효능을 확인하였으며, 그 결과 PBE 2000 ㎍/ml 처리시 중성지방이 약 18% 감소 - 44 - 함을 확인하였음

지방세포 분화유도시 PBE 동시처리 후 지방세포분화 및 지방합성관련 유전자 발현 억제 확인 

지방전구세포를 지방세포로 분화 유도시 PBE 동시처리하고 8일 경과시 

지방세포 분화에 관여하는 전사인자 PPAR-γ 와 C/EBPα 유전자 및 지질합성에 관여하는 

SREBP, FAS, LPL 및 SCD 유전자의 전사체 발현 양상을 real-time PCR을 통해 확인한 결과, 

시료 1000 ㎍/ml 이상의 농도에서 지방세포 분화 및 지방합성에 관여하는 인자들의 유전자 전사체 발현양이 모두 80% 이상 감소함을 확인 할 수 있었음

이상의 결과를 통해 PBE의 adipogenesis 억제 효과가 있음을 확인하였으므로 PBE는 비만 예방에 효율적으로 사용가능할 것임을 추정할 수 있음

DIO (diet induced obese) ICR계 마우스를 이용한 흰점박이꽃무지 현탁액의 체중감소 효과 확인 

: High fat diet (HFD 45% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 동시

 흰점박이꽃무지 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경구 투여하여 

체중감소효과를 측정하였으며, 양성대조군으로 마테 추출물을 사용하였음

고지방식이를 통해 비만을 유도하는 동시에 흰점박이꽃무지현탁액을 100, 3000 mg/kg의 농도로 경구 투여 한 결과 

흰점박이꽃무지 현탁액 3000 mg/kg/day를 경구 투여한 경우 체중 은 약 31.5% 정도 감소함을 확인하였음

DIO (diet induced obese) ICR계 마우스를 이용한 흰점박이꽃무지 현탁액 경구투여 후 장기상대 중량 측정 

: High fat diet (HFD 45% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 동시 

흰점박이꽃무지 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경구 투여하여 주변 지방조직 및 부고환 지방 조직의 상대중량을 측정하여 지방의 감소를 확인

고지방식이를 통해 비만을 유도하는 동시에 흰점박이꽃무지 현탁액을 100, 3000 mg/kg의 농도로 경구 투여 한 결과 

주변지방조직의 경우 각각 7.3%, 23.4%의 지방조직의 무게 감소 를 확인할 수 있었음

DIO (diet induced obese) ICR계 마우스를 이용한 흰점박이꽃무지 현탁액 경구 투여 후 부고환 지방의 크기 변화 확인 :

 

High fat diet (HFD 45% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 동시 

흰점박이꽃무지 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경구 투여하여 

내장 지방량을 확인 할 수 있는 생식기 지방의 크기 확인을 위해 부고환 지방의 크기를 측정하였음

고지방식이를 통한 비만 유도 동시 흰점박이꽃무지 현탁액 3000 mg/kg/day로 6주간 처리 한 후

 부고환 지방의 크기변화를 측정한 결과 약 20% 감소함을 확인할 수 있었음

: High fat diet (HFD 45% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 동시 

장수풍뎅이 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경 구 투여하여 간에 침착된 지방의 정도를 확인하였음

고지방식이를 통한 비만 유도 동시 흰점박이꽃무지 현탁액 100, 3000 mg/kg/day로 6주간 처리한 후 

간 지방 침착 정도를 측정한 결과 고지방식이로 유도한 비만 mouse의 간과 비교시 

 흰점박이꽃무지 현탁액을 경구 투여한 mouse 군에서 농도 의존적으로 지방 침착 정 도가 줄어드는 것을 확인할 수 있었음

: High fat diet (HFD 45% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 동시

 흰점박이꽃무지 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경구 투여한 후 혈액 내 중성지방함량

High fat diet (HFD 45% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 동시 

흰점박이꽃무지 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경구 투여한 후 혈액 내 중성지방함량을 측정한 결과 

3000 mg/kg/day 처리 군에서 약 13% 혈액내 중성지방 함량이 감소함을 확인하였음 

비만유도 후 PBE 처리 시 항비만 효능 검정 

PBE의 성숙한 지방세포 사멸효과 확인 

<성숙한 지방세포에 PBE 처리후 세포생존률(A), 총지방축적률(B) 및 중성지방합성률(C) 분석> 

지방전구세포를 성숙한 지방세포로 분화시킨 후 PBE 24시간 처리한 다음 MTS로 세포 생존률 확인을 통해 PBE의 지방세포사멸 효과를 확인하였으며, 

이 때 총지방축적률 및 중성지방합성 률 또한 감소됨을 확인함으로써 PBE는 비만에 대한 치료효과가 있음을 추정할 수 있음

2013년 보고서에 따르면 성숙한 지방세포에 대한 지방세포 사멸효과의 데이터를 제시한 바 있으나 

재반복하여 검증한 결과 지방세포 사멸효과를 확인할 수 없었음

 이에 성숙한 지방세 포에 대한 흰점박이 꽃무지 추출물의 지방세포 사멸효과에 대한 데이터를 정정 보고함
지방전구세포를 지방세포로 분화 유도한 후 흰점박이꽃무지 추출물 72시간 처리 후

 지방세 포에서 중성지방이 분해되면서 방출되는 glyceorl 방출양을 측정해본 결과 

흰점박이꽃무지 추출물 2000 ug/ml 처리 군에서 약 21% 가량 glycerol 방출양이 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, 

또한 이에 지방세포 크기를 측정해본 결과 약 2000 ug/ml 처리 군에서 약 60% 이상 지방세포의 크기가 줄어드는 것을 확인할 수 있었음

 

: High fat diet (HFD 60% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA)유도 후 

흰점박이꽃무지 유충 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day로 경구 투여하 여 체중감소효과를 측정하였으며, 양성대조군으로 마테 추출물을 사용하였음

 

고지방식이를 통해 비만을 유도한 후 흰점박이꽃무지 유충 현탁액을 3000 mg/kg의 농도로 6주간 경구 투여 한 결과

 고지방식이로 비만 유도 유도한 군에 비해 체중 증가율이 약 15% 감소하는 것을 확인할 수 있었음

DIO (diet induced obese) ICR계 마우스를 이용한 흰점박이꽃무지 유충 현탁액 경구투 여 후 장기 상대 중량 측정

고지방식이를 통해 비만을 유도한 후 흰점박이꽃무지 유충 현탁액을 100, 3000 mg/kg의 농도로 경구투여 한 후 

장기의 상대중량을 비교시 HFD group에 비해 3000 mg/kg/day로 경 구투여한 군에서, 간조직 무게의 경우 약 약 14% 무게 감소가 관찰되었음

DIO (diet induced obese) ICR계 마우스를 이용한 흰점박이꽃무지 유충 현탁액 경구 투여 후 혈액학적 분석 

 

High fat diet (HFD 60% fat contain; Rodent diet D12492, Research diet, New Brunswick, NJ, USA) 유도 후 

흰점박이꽃무지 유충 현탁액을 6주간 100, 3000 mg/kg/day 로 경구 투여한 후 

혈액 내 간손상 지표 및 지질관련 지표를 측정한 결과 지방간 유도시 ALT의 함량이 증가함을 확인하였고,

 이에 대해 흰점박이 꽃무지 유충 추출물 처리군의 경 우 지방간지표인 ALT의 함량을 농도 의존적으로 각각 9%, 12% 감소시켰으며, 

지질대사이 상시 관찰되는 LDL의 수치의 경우에도 농도 의존적으로 각각 약 14%, 32% 감소함을 확인 하였음