흰점박이꽃무지 추출물의 항염증 효능 검증 > 건강이야기

「본 자료는 농림축산식품부 국립농업과학원에서 2014년 발표한 

"곤충자원의 식·약용 소재화를 위한 약리성 검정 및 독성평가"

에서 발췌함을 알려드립니다.」

흰점박이꽃무지 추출물(PBE)의 항염증 효능 검정

흰점박이 꽃무지 추출물(PBE) 처리시 세포 생장률 및 독성 분석

흰점박이꽃무지 추출물(PBE)은 4000 ㎍/㎖ 의 농도까지 RAW264.7 세포에 대한 독성을 보이지 않았고,

5000 ㎍/㎖ 의 농도에서 21% 정도 세포생장을 저해하였음

양성대조군 추출물 처리시 세포 생장률 및 독성 분석

<RAW264.7 세포에 대한 강황추출물 및 curcumin의 독성 검정 : MTS assay>

항염증 효능을 갖고 있는 것으로 보고된 천연 물질인 강황(Curcumin longa)와 

이의 항염증 효능을 나타내는 주요성분인 curcumin을 양성 대조군으로 사용하기 위해

 RAW264.7 세포에 24시간 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과,

강황은 1000 ㎍/㎖, curcumin은 50 ㎍/㎖의 농도까지 세포생장율을 저해하지 않았으므로 추후

실험에서 이 농도로 실험을 수행하였음

흰점박이꽃무지 추출물 처리시 사이토카인 및 염증 매개물 전사체 발현 억제 확인

<Real-time PCR primers의 염기서열> 

<흰점박이꽃무지 유충 추출물에 의한 염증성 매개물의 발현 관찰>

Real-time에 의한 Raw 264.7 세포 분석에서 흼점박이꽃무지 추출물의 항염증효과 측정 결과에 관한 것

(TNF-α: TNF-α primer를 사용한 군, IL-6: IL-6 primer를 사용한 군, 

INOS: INOS primer를 사용한 군, DMSO: 추출물 제조에 DMSO를 사용한 군, D.W.:추출물 제조에 D.W를 사용한 군)

흰점박이꽃무지 유충 추출물 처리시 사이토카인 단백질 발현 억제 확인

​LPS에 의해 염증 유도된 RAW264.7 세포에 흰점박이꽃무지 추출물(PBE) 처리 후 

염증관련 사이토카인 발현량을 ELISA 분석에 의해 확인한 결과, 농도 의존적으로 발현이 억제됨을 확인 

​흰점박이 꽃무지 추출물(PBE) 처리시 염증매개물질인 COX-2와 iNOS 단백질 발현 억제 확인

<염증 유도된 RAW264.7 세포에 PBE 처리 후 염증매개물질 발현 확인 : Western bolt>
 

염증유도된 RAw264.7 세포에 흰점박이꽃무지 추출물(PBE) 처리 후 

발열 및 부종을 생성하여 염증을 증폭하는 prostaglandin E2를 생성하는 효소인 COW-2의 발현량을 확인해 본 결과 

대조인 C. longa(1000  µg/m) 처리시 COX-2 발현이 19.5% 억제된데 비해 

PBE 500 µg/ml 처리시에 37%, 1000 µg/ml 처리시에는 100% 발현이 저해됨을 확인할 수 있었음.

한편, COX-2는 혈전을 예방하고 혈관을 확장하는 물질인 prostacyclin I2의 생성도 촉진하는 효소이므로 

염증은 감소되더라도 혈전이 생성되어 혈압이 올라가는 부작용이 생기면 안되므로 

혈관을 확장시키는 NO를 생성하는 iNOS가 발현을 분석한 결과, 500 µg/ml 까지는 iNOS 발현이 거의 정상과 동일하므로 

이 농도가 효율적일 것이라 판단되며, 이 때 대조인 C. longa (1000 µg/ml) 처리시 iNOS가 80%정도 감소되므로 

염증을 줄이더라도 혈전생성 및 혈압상승 을 야기할수 있을 것으로 판단되며, 

전체 결과를 통해 강황보다 PBE가 염증을 줄이는 효과는 더 좋으면서 부작용 또한 감소시킬 수 있을 것이라 추정

염증유도된 RAW264.7 세포에 흰점박이꽃무지 추출물(PBE) 처리 후 염증신호전달과정 유전자 발현양상 변화분석

<염증유도된 RAW264.7 세포에 PBE 처리 후 염증신호전달 관련 유전자 발현 분석 : PCR array> 

PCR array를 이용하여 염증유도된 RAW 264.7 세포에 흰점박이꽃무지 추출물(PBE)을 3000 µg/ml의 농도로 처리한 후 

염증신호전달과정 관련 유전자 84개의 발현 변화 분석 결과, 

PBE 처리전에 비해 2배 이상 발현량의 변화가 있는 유전자는 24개 였으며 

이들 중 PBE 처리 후 발 현량이 증가된 것은 12개 였으며 

chemokine(C-C motif) ligand 1, 9, 15, chemokine (C-C motif) receptor 2, 9, interleukin 10 receptor, 

beta, interleukin 13 receptor, alpha 1, 

interleukin 18, interleukin 1 receptor, type I, iInterleukin 6 signal transducer, 

transforming growth factor, beta 1, toll interacting protein이 있었고, 

PBE 처리 후 발현량이 감소된 것도 12개 였으며 

chemokine (C-C motif) ligand 3, 6, 8, 12, 20, 24, chemokine (C-X3-C motif) ligand 1, 

chemokine (C motif) receptor 1, chemokine (C-X-C motif) receptor 2, interleukin 1 beta, 

aminoacyl tRNA synthetase complex-interacting multifunctional protein 1, CD40 ligand가 있었으며, 추후 재검정할계획임.

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흰점박이꽃무지 분말 처리시 NF-κB 핵으로 translocation 억제 확인

면역형광염색을 통한 세포내의 NF-κB의 위치확인 결과에 관한 것임

(DMSO:추출물제조에 DMSO를 사용한 군 D.W.:추출물제조에 D.W.를 사용한 군, 

NF-κB: 면역형광염색을 시행한 군, DAPI: DAPI염색을 시행한 군)

흰점박이꽃무지 분말 처리시 NF-κB 핵에서 발현 억제 확인

세포에서 분리한 핵에서의 NF-κB 발현량을 western blot으로 확인한 결과사진임